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如何辨別倒置生物顯微鏡下的壞死細胞

發(fā)布時間:2020/3/11 點擊量:5303

如何辨別倒置生物顯微鏡下的壞死細胞

    倒置生物顯微鏡多用來觀察和研究生物切片、細胞細菌以及活細胞組織培養(yǎng)、流質(zhì)沉淀等,同時也可以用來觀察其他透明或半透明物體以及粉末、細小顆粒等。在觀察細胞時,有些實驗要求用藥物來處理細胞,在不同藥物濃度下細胞可能壞死,也可能調(diào)亡。先介紹兩個概念:
    1)凋亡:凋亡是指細胞在一定生理和病理條件下,遵循自身程序,由基因調(diào)控的主動性死亡過程。因此,從活細胞凋亡到死亡有一定過程和有一定時間跨度的,根據(jù)凋亡的誘因不同,時間跨度從幾小時到幾天不等。凋亡過程中首先出現(xiàn)的是細胞膜的不對稱改變即PS的外翻和線粒體的膜電位的改變;隨后出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮、邊緣化,細胞體積變小,變形,細胞膜的通透性改變和DNA的片段化;凋亡晚期細胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體,貼壁細胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落;zui后隨溶酶體裂解、蛋白酶的釋放激活,細胞崩解。因此,凋亡的一個動態(tài)的過程,隨時間的推移、誘導(dǎo)凋亡原因和檢測方法的不同,檢測和觀察結(jié)果也大不相同。
    2)壞死:活細胞在某些因素的作用下直接進入死亡階段,從而很難和晚期凋亡相區(qū)別。
    那么在倒置熒光顯微鏡下如何辨別已經(jīng)壞死的細胞呢?
    我們采用Hoechst33342和碘化丙啶(PI)雙染的方法。細胞發(fā)生凋亡時,染色質(zhì)會固縮。Hoechst 33342可以穿透細胞膜,染色后凋亡細胞熒光會比正常細胞明顯增強。碘化丙啶(PI)不能穿透細胞膜,對于具有完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能染色。而對于壞死細胞,其細胞膜的完整性喪失,碘化丙啶(PI)可以染色壞死細胞。上述兩種染料雙染后,使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測時,正常細胞為弱紅色熒光+弱藍色熒光,凋亡細胞為弱紅色熒光+強藍色熒光,壞死細胞為強紅色熒光+強紅色熒光+強藍色熒光。這種凋亡和壞死鑒定的試劑盒在市場上也很常見。

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